线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性测试盒实验科研

线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性测试盒实验科研

测定意义：线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成，也可逆过程水解ATP。此外，复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。

测定原理：复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。

需要的仪器，耗材:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。


样本处理
1. 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1.0 mL 提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2. 4 ℃ 600g 离心 10min。

3. 将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000g 离心 15min。

4. 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅴ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。

5. 在沉淀中加入 600μL 试剂一，超声波破碎（功率 20%，超声 5 秒，间隔 10 秒，重复 12 次），用于复合体Ⅴ酶 活性测定，并且用于蛋白含量测定。