羧酸酯酶（CarE）测试盒-实验原理

羧酸酯酶（CarE）测试盒-实验原理

测定意义：哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

测定原理：CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固篮显色；在450 nm光吸收增加速率，计算CarE活性。

需要的仪器，耗材:紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

样本处理

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液， 超声波破碎细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）；然后15000rpm，4℃，离心10min，取上清（若上清 不够澄清，建议重复上述离心步骤），置于冰上待检。

组织：按照组织质量（g）: 提取液体积(mL)为1 : 5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进 行冰浴匀浆。15000rpm，4℃，离心10min，取上清（若上清不够澄清，建议重复上述离心步骤），置于冰上待检。